El proyecto LIFE4FIR está trabajando actualmente en la acción del proyecto A 1.4 ‘Seed conservation at low temperature (-18°C), application of cryopreservation protocols’.
Las actividades relacionan el desarrollo de técnicas para la conservación a bajas temperaturas de semillas, polen, embriones aislados y líneas de callos embriogénicos de Abies nebrodensis. Estas actividades son funcionales a la implementación del banco de esperma y criobanco.
Cribado de semillas por rayos X.
El problema de las semillas vanas es el principal obstáculo en la germinación de las semillas de Abies nebrodiensis. El análisis de rayos X es una técnica desarrollada por IBE-CNR para la selección rápida de semillas con embrión y semillas vacías de Abies nebrodensis (Figura 1). Este procedimiento representa un cribado masivo de las semillas que se utilizarán para las pruebas de germinación o que se almacenarán a -18 ° C.
Figura 1 y Figura 2. Semillas maduras de Abies nebrodiensis observadas bajo rayos X para la selección de semillas con embrión (marcos superiores) y semillas vacías (marcos inferiores)
Figura 3. Semillas maduras de Abies nebrodiensis con embrión, vistas mediante rayos X
Prove di germinazione e coltura
Se realizaron pruebas de germinación in vitro de semillas almacenadas a -18 ° C y embriones extraídos de semillas maduras y conservados en nevera (4 ° C) en los laboratorios CNR-IBE y Unipa-Saaf, colocando los embriones aislados en papel de filtro y luego en diferentes sustratos de cultivo (Figuras 4, 5 y 6).
Figura 4. Aislamiento de embriones maduros de semillas de Abies nebrodensis
Figura 5. Germinación in vitro de un embrión de Abies nebrodensis
Figura 6. Germinación y desarrollo in vitro de embriones de Abies nebrodensis
En los dos laboratorios se están realizando pruebas de cultivo in vitro de embriones inmaduros aislados de conos recolectados en julio, con el fin de obtener embriogénesis directa o indirecta. El callo embriogénico, obtenido de la escisión de los embriones extraídos de las semillas de los conos inmaduros de las plantas 6, 8, 10, 15, 16 y 27, muestra un crecimiento bastante lento. Se están probando varios medios de cultivo que contienen diferentes sales básicas y hormonas de crecimiento vegetal. Un mejor crecimiento de los callos parece verse favorecido por el aporte de citoquininas.
También se están realizando pruebas de germinación en muestras de polen de Abies nebrodensis almacenadas a bajas temperaturas (Fig. 7).
Figura 7: grano de polen de Abies nebrodensis en la fase de germinación
